MICROSCOPIE CONFOCALE
La microscopie confocale est basée sur la microscopie à fluorescence où la lampe à lumière blanche est remplacée par un laser fournissant une lumière parfaitement cohérente. Le principe est de pratiquer des coupes optiques virtuelles dans l'objet observé et de n'enregistrer que l'image de la fluorescence émise dans le plan.
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Le rayon laser excitateur pénètres dans l'échantillon marqué avec des fluorochromes. Il y a alors émission de rayons fluorescents provenant de différentes plans de la préparation. L'image est construite point par point par balayage à l'aide du miroir dichroïque. L'ajustement du diaphragame (ou pinhole) permet une résolution spatiale maximale Le signal émis par l'échantillon est récupéré par le détecteur, amplifié et traité afin d'améliorer le rapport signal sur bruit puis numérisé. L'image est construite point par point par balayage X,Y du champ à la vitesse de 5-7 images 512*512 par seconde La saisie des différents plans optiques dans l'épaisseur de l'échantillon se fait en se déplaçant dans la préparation suivant l'axe Z |
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La grandeur pertinente est l'ouverture numérique de l'objectif.
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Dx=0.1mm |
Dz=0.4mm |
Quelques images obtenues avec le microsocope Zeiss LM 150
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